观察高尔基染色后的白鼠脑神经组织
何谓高尔基染色法
高尔基染色(Golgi staining)是一种镀银染色法,可将脑中的微细神经细胞(神经元)的轴索或树状突起染成黑色后,使其构造(树突棘)可视化,从早期开始用于观察白鼠或小鼠等动物脑切片中神经细胞的结构及其变化。
高尔基染色由致力于神经组织金属浸渍染色(银染色)等实验的诺贝尔生理学及医学奖获得者、意大利人卡米洛·高尔基于1873年发表,将在固定液(包含四氧化锇与重铬酸钾)固定后的脑标本浸入硝酸银溶液进行染色时,神经细🍎胞的神经元呈现为黑色。之后,在荷兰医生科克斯于1891年发表的高尔基-科克斯染色(Golgi-Cox staining)中,使用的化合物经过改良,通过将脑切片用重铬酸钾、铬酸钾、氯化汞溶液固定并利用氨水使其显色为黑色(黑化),能够获𝓡得更稳定的结果。
观察高尔基染色后的白鼠脑神经组织
脑的轴索凭借脑神经神经元的的繁殖而覆盖,次数非常庞大的轴索凭借电信宽带号赋予创设出数据网络上,并以此达成记忆训练或自我认知等领导次的活动方案设计。實驗或探究用到食草动物脑,严格按照高尔基印染實驗方案设计通过固定好后温度过低生产制作持续切成片,路过印染后通过了解。 长时期被广泛用于样本的白鼠或小鼠脑基于其企业自身越来越小,特别精神上皮受损人体细胞的轴索或树状突起物颇为细碎,在高倍下的显分子运动察时,基于脑切成片具备着固定的规格,所以就很难对切成片中微细的工作目标物参与全幅对焦。仅仅而且样本的轻微的偏斜或相对高度差对对焦存在严重的危害,仅仅给高系数仔细查看及评介产生吃力,还加太大收获要应广泛用于发过文献资料或专题讨论会等明白形象的困难程度,这也是精神仔细查看时的4个大问题。另一,拿来要根据高系数明白地仔细查看精神上皮受损人体细胞外观意外,还都要立即最准确地正确具备所仔细查看的地理位置是大部分脑切成片中的什么地理位置。为收获都要的签别率而升高系数则视觉空间将变小,要正确具备脑切成片一体化布局形象就不准不缩放系数致使签别率减低。方便对要填写精神上皮受损人体细胞型态的高系数形象与可填写切成片一体化布局的低系数形象参与无缝对接仔细查看,忽然都要对形象参与裁切治理 ,保存图片并方法数据中升集团的高系数形象根据人工手动开启机组参与裁切,仅仅复杂、困难程度大,还都要使用大规模时期及劳动力。解决脑切片的高分辨率观察的课题
在进行脑切片的观察时,不仅制作脑切片染色标本具有一定难度,使用显微镜观察时也需要操作人员具备高超技术,即使是熟练人员也需高度集中注意力并花费大量劳力。
基恩士通过对焦及载物台移动等驱动系统的全电动化,将显微镜观察中的各种繁杂而高难度的处理仅ꦿ以鼠标操作实现简约化。开发了能够显著提高从拍摄数量庞大的图像到🐻之后的定量化等分析处理的效率,且兼顾清晰的高倍率图像与把握整个视野的庞大数据量的一体化荧光显微成像系统BZ-X800。
兼具整体图像与高倍率,实现简单无缝的高分辨率观察
以下图片是利用BZ-X800拍摄的白鼠脑切片高尔基染色标本中的神经组织观察图像。
通常情况下,在标本具有厚度或倾斜、高度差时只能对焦在一部分样品上,很难把握神经细胞的立体结构,但通过“Z栈”则可在Z轴方向自动获取多张图像,且利用“全幅对焦”功能只对对焦部分进行合成,从而简单获取Z方向整体高度上对焦的全幅对焦图像,得以清晰观察微细神经细胞或因高尔基染色而黑化的部分形状。
另外,对于在高倍率下无法将整体图像纳入视野的脑切片,仅需指定拍摄范围的外沿部3点,在X、Y轴方向电动移动载物台的同时拍摄并自动拼接多张高倍率、高分辨率图像,即可简单获取以高分辨率捕捉整体图像的全幅对焦图像。
还可以同时使用这些全幅对焦功能与图像拼🐎接,可随时把握脑切片的具体部位的同时,以高倍率观察微细神经细胞。
可以确认从朝着Z轴走向變化的多张彩色图文中只合成图片对焦方面的全幅对焦工作,就可以建设面前纵向均为对焦的彩色图文。还有,可以确认剪切在电信载物台的与此同时所拍的多张高系数彩色图文的彩色图文剪切工作,就可以简单想要高效率的获取到切块纵向的拿高签别率彩色图文。
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Z栈
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全幅对焦
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图形裁剪
![全幅对焦图像构建](/Images/ss_bz-casestudy_brain-section_004_1869265.jpg)
使用物镜:CFI Plan Apo λ10x
图像拼接:16张 × 13张
直接执行准确的计数及测量
BZ-X800不仅能够清晰观察,还可以使用该图像进行快速的定量测量及分析。
使用“混合细胞计数”功能可将切片整体设为掩膜区域,并按照颜色差异或亮度信息对目标物进行抽取定量化。自动计算脑切片整体中神经细胞所占比重,结果可以CSV格式输出。在分析培养神经细胞时,BZ系列搭载了相差差模式,可避免由于背景亮度不均对培养细胞抽取的影响,从而能够实现准确的定量分析。
另外,通过使用“ꦫ宏细胞计数”,可将混合细胞计数时的测量条件批量应用在其他多张图像的处理,可大幅度缩短测量时间。通常情况下,对图像的定量分析依赖于手动操作,不仅耗费大量精力与时间,测量条件也由于操作人员不同而产生偏差。使用宏细胞计数功能,则可以消除因条件偏差造成的误差𒈔,在短时间内混去高可靠性数据。
1台即可用于多用途
BZ-X800犹如其名合二为一化荧光显微显像系统化,研制成功了高灵敏性度、满辩认率黑白两色制冷机CCD单反及暗室,可以能够系统荧光、明视场、相位差下的高较高水准了解与浅析。除 高尔基染色的脑切块意外,还可以能够系统多孔培训板,仅用1台可以了清晰度地摄像所有各样的样本,并满足合理而无问题的侧量与评述。仅用1台可以了可以能够系统所有各样的样本的了解浅析,能够促进节约开支器械区域。- 对于在高倍率下难以完整地纳入视野的切片整体,通过自动拍摄并拼接多张图像的“图像拼接”,即可在兼顾将切片完整地纳入视野的大视野及高倍率下的高分辨率的条件下轻松拍摄一张拼接图像。
- 通过“Z栈”在Z轴方向上拍摄的多张图像中,使用只合成对焦部分的“全幅对焦”功能,可构建整个标本的对焦图像。
- 通过“混合细胞计数”准确地抽取目标细胞并计数。可计算比重并输出表计算形式的数据。
- 使用“宏细胞计数”,可将混合细胞计数的测量条件批量适用于多张图像处理,迅速在同一条件下执行分析。
- 仅用1台即可支持荧光、明视场、相位差下各种标本的观察与分析,有助于节省器材空间。
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